多西他赛Docetaxel

　　Docetaxel （RP-56976） 是一种微管解聚 （microtubule depolymerization） 抑制剂，其 IC50 值为 0.2 μM。Docetaxel 是紫杉醇的半合成类似物，能减弱 bcl-2 和 bcl-xL 基因表达的影响。Docetaxel 阻滞 G2/M 细胞周期，导致细胞凋亡（apoptosis）。Docetaxel 具有抗肿瘤活性。

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　　生物活性

　　体外研究

　　多西他赛（RP-56976）和葡萄糖磷酰胺（GLU）单独或联合处理对细胞活力的影响呈剂量依赖性。PC-3和LNCaP细胞中GLU的IC50分别为70±4 μ M和86.8±8 μ M;分别。单药多西他赛在PC-3和LNCaP细胞中的IC50分别为3.08±0.4 nM和1.46±0.2 nM;分别。

　　研究发现，GLU与多西紫杉醇共作用可增强PC-3和LNCaP细胞的细胞毒性，其IC50值分别为2.7±0.1 nM和0.75±0.3 nM;。

　　NCI-H460对多西他赛的IC50在24小时为116 nM，在72小时为30 nM。根据DTP data Search报道的数据，NCI-60细胞面板对多西他赛的平均IC50为14-34 nM。

　　MCE尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

　　体内研究

　　在雌性小鼠中，多西他赛（RP-56976）诱导的光后14h （HALO）组的肠道凋亡明显大于2-HALO组。多西他赛在2-HALO组中Bax表达显著升高，而在14-HALO组中无明显升高。另一方面，14-HALO组中cleaved - Caspase-3表达明显升高，而2-HALO组中则没有。多西紫杉醇14 HALO给药后，Wee1和磷酸化CKD1的表达明显升高，2 HALO给药后无明显升高。此外，多西他赛在14-HALO组中显著降低survivin表达，但在2-HALO组中无显著降低。14-HALO组survivin表达水平明显低于药物治疗的2-HALO组。

　　Piperine （PIP）静脉给药3.5 mg/kg，口服35 mg/kg和3.5 mg/kg，多西他赛（DOX）静脉给药7 mg/kg。大鼠口服35 mg/kg的PIP和静脉给药7 mg/kg的多西他赛。联合使用PIP和多西他赛可导致两者体内暴露的协同增加。

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　　实验参考方法

　　细胞试验

　　评估单药浓度-反应曲线。PC-3和LNCaP的播种密度为2000细胞/孔，在96孔板中进行。在不同的药物浓度下，用每种药物和它们的组合治疗细胞72小时。多西他赛的使用浓度为0.1-1,000 nM。使用浓度为0.1-300 μ m的GLU。在药物暴露结束时，使用SRB试验评估细胞毒性。暴露72 h后，细胞用10%酸（150 μ L）在4℃固定1 h。然后，细胞在室温下用1%醋酸溶解0.4% SRB染色10分钟。然后将板风干24小时，使染料与150 μ L Tris （10 mM, PH 7.4）在摇床上以1600 rpm的速度溶解5分钟。然后在545 nM处用微板读取器测量吸光度。结果用吸光度与对照的相对百分比表示。

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　　动物实验方法

　　老鼠

　　实验采用5周龄雄性Balb/c小鼠。多西他赛（0,10,20,30,40,60,80 mg/kg /周）给小鼠每周一次，持续3周。由于多西他赛每周超过30 mg/kg会导致小鼠体重减轻，因此判断多西他赛每周20 mg/kg为大无毒剂量。多西他赛（20 mg/kg /周）每周给小鼠一次，持续3周，在以下不同点之一（2,10,14或22 HALO）。最后一次给药72小时后，取下小肠肠粘膜（近8 cm），固定于20 N Mildform溶液（缓冲溶液中含8%甲醛）中，包埋石蜡块，5 μm切片置于玻片上。凋亡检测采用末端脱氧核苷基转移酶介导的dUTP镍端标记（TUNEL）方法，使用Apop Tag过氧化物酶原位凋亡检测试剂盒。

　　老鼠

　　实验采用雄性sd大鼠，体重230-250 g, 6-7周龄。将25只SD大鼠分为5组，分别给予多西他赛（7mg /kg，口服）、PIP （35mg /kg，口服）及DOX+PIP联合给药、PIP （3.5 mg/kg，口服）和PIP （3.5 mg/kg，口服）。在给药前一天，老鼠被麻醉。右颈内静脉插管用聚乙烯管（0.5 mm ID, 1 mm）收集血液。

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